Isolation of a coronavirus from a green-cheeked Amazon parrot (Amazon viridigenalis Cassin)

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Abstract
A virus (AV71/99) was isolated from a green-cheeked Amazon parrot by propagation and passage in both primary embryo liver cells derived from blue and yellow macaw (Ara ararauna) embryos and chicken embryo liver cells. Electron microscopic examination of cytopathic agents derived from both types of cell cultures suggested that it was a coronavirus. This was confirmed using a pan-coronavirus reverse transcriptase polymerase chain reaction that amplified part of gene 1 that encodes the RNA-dependent RNA polymerase. The deduced sequence of 66 amino acids had 66 to 74% amino acid identity with the corresponding sequence of coronaviruses in groups 1, 2 and 3. Several other oligonucleotide primer pairs that give PCR products corresponding to genes 3, 5, N and the 3′-untranslated region of infectious bronchitis virus, turkey coronavirus and pheasant coronavirus (all in group 3) failed to do so with RNA from the parrot coronavirus. This is the first demonstration of a coronavirus in a psittacine species. Isolement d'un coronavirus d'un perroquet amazone à joues vertes (Amazon viridigenalis Cassin) Un virus (AV71/99) a été isolé d'un perroquet amazone à joues vertes sur des cultures primaires d'hépatocytes d'embryon d'ara bleu (Ara ararauna) et d'hépatocytes d'embryon de poulet, en réalisant des passages. L'examen en microscopie électronique des agents cytopathogènes dérivés des deux types de culture cellulaire a suggéré la présence d'un coronavirus. Ceci a été confirmé en utilisant les réactions de transcription inverse et d'amplification en chaîne par polymérase qui ont amplifié une partie du gène 1 qui code l'ARN polymérase ARN dépendante. La séquence déduite de 66 acides aminés présentait 66 à 74% d'identité en acides aminés avec la séquence correspondante des coronavirus des groupes 1, 2, et 3. Plusieurs autres paires d'amorce oligonucléotidique qui donnent des produits PCR correspondant aux gènes 3, 5, N et à la région 3' non traduite du virus de la bronchite infectieuse, du coronavirus de la dinde et du coronavirus du faisan (tous du groupe 3) n'ont pu le faire avec l'ARN du coronavirus du perroquet. C'est la première mise en évidence d'un coronavirus chez les psittacidés. Isolierung eines Coronavirus aus einer Grünwangen-Amazone (Amazona viridigenalis Cassin) Aus einer Grünwangen-Amazone (Amazon viridigenalis Cassin) wurde durch Anzüchtung und Passagierung in primären Embryoleberzellen von blauen und gelben Aras (Ara ararauna) sowie in Hühnerembryoleberzellen ein Virus isoliert (AV71/99). Die elektronenmikroskopische Untersuchung der zytopathogenen Agens aus beiden Zellkulturtypen ließ vermuten, dass es sich um ein Coronavirus handelte. Dieses wurde mittels einer für alle Coronaviren spezifischen Reverse Transkriptase- Polymerasekettenreaktion, die Teile des für die RNS-abhängige RNS-Polymerase kodierende Gen 1 amplifizierte. Die abgeleitete Sequenz aus 66 Aminosäuren wies eine 66–74%ige Aminosäurenübereinstimmung mit den entsprechenden Sequenzen der Coronaviren der Gruppen 1, 2 und 3 auf. Mehrere andere Oligonukleotidprimerpaare, die den Genen 3, 5, N und der nicht translatierten 3‘-Region des infektiösen Bronchitisvirus, des Putencoronavirus und des Fasanencoronavirus (alle in Gruppe 3) entsprechende PCR-Produkte amplifizieren, gelang dies nicht mit der RNS aus dem Papageiencoronavirus. Dies ist die Erstbeschreibung eines Coronavirus in einer Psittazidenspezies. Aislamiento de un coronavirus de un loro Amapola (Amazon viridigenalis Cassin) Se aisló un virus (AV71/99) de un loro Amapola mediante propagación y pases en células primarias de hígado de embrión derivadas de embriones de guacamayo azul y amarillo (Ara ararauna) y en células hepáticas de embrión de pollo. Los estudios en microscopio electrónico de los agentes citopáticos procedentes de ambos tipos de cultivos celulares sugirieron que se trataba de un coronavirus. Esto se confirmó mediante una transcriptasa reversa-reacción en cadena de la polimerasa de pan-coronavirus que amplificaba parte del gen 1 que codifica la RNA polimerasa-RNA dependiente. La secuencia deducida de 66 aminoácidos tenía entre el 66 al 74% de similitud aminoacídica con la correspondiente secuencia de los grupos 1, 2 y 3 de Coronavirus. Otros pares de cebadores oligonucleotídicos, que producen productos de PCR correspondientes a los genes 3, 5, N y a la región no codificantes 3’ del virus de la bronquitis infecciosa, del coronavirus del pavo y del coronavirus del faisán (todos ellos en el grupo 3), no amplificaron en el caso del coronavirus del loro. Esta es la primera descripción de un coronavirus en especies de psitácidas.