Immunologic characterization of human seminal leucine aminopeptidase (LAP) and its medicolegal use

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Abstract
A new method for identification of seminal stains is described, based on the immunologic demonstration of leucine aminopeptidase (LAP), which is extremely abundant in human semen and specific for the prostate as well as semen. An antiserum against human seminal plasma was obtained by repeated immunization of rabbits with seminal plasma and Freund's adjuvant. Ouchterlony's double immunodiffusion test and Culliford's precipitin electrophoresis were performed to demonstrate specific proteins of seminal plasma. LAP activity was visualized withL-leucyl-β-naphthylamide as substrate and with Fast Garnet GBC as coupler. The immunologic analysis of LAP produced two precipitin lines with enzyme activity. One was observed in kidney, jejunum, pancreas, prostate, as well as in semen, and was completely absorbed with kidney homogenates. The other was found only in semen and the prostate and was not absorbed with kidney homogenates. When the anti-seminal plasma serum absorbed with the kidney was used, the semen-specific LAP could be demonstrated by precipitin electrophoresis only in seminal stains stored for up to 2 months, whereas it was not demonstrated in stains from other human body fluids. By means of precipitin electrophoresis the detection of the semen-specific LAP was possible at semen dilutions of up to 1:32. The method described here greatly enhances the value of semen identification and is quite recommendable for the examination of stains in medicolegal practice. Es wird über eine neue Methode zum Nachweis von Spermaspuren berichtet, die auf immunologischer Darstellung der Leucinaminopeptidase (LAP) beruht, die im menschlichen Sperma besonders reichlich vorhanden und sowohl für das Sperma als auch für die Prostata spezifisch ist. Ein gegen menschliches Spermaplasma gerichtetes Antiserum wurde durch wiederholtes Immunisieren von Kaninchen mit Hilfe von Freunds Adjuvans gewonnen. Zur Demonstration der spezifischen Proteine des Spermaplasmas wurden der Doppelimmunodiffusionstest nach Ouchterlony und die Überwanderungselektrophorese nach Culliford benutzt. Die Darstellung der LAP erfolgte mitL-Leucin-β-Naphthylamid als Substrat und mit Fast Garnet GBC als Kuppler. Die immunologische Analyse der LAP ergab zwei Präzipitatlinien mit enzymatischer Aktivität. Die eine wurde im Sperma sowie in Nieren, Dünndarm, Pankreas und Prostata beobachtet und mit Nierenhomogenat vollständig absorbiert. Die andere war nur im Sperma und in der Prostata zu finden und ließ sich mit Nierenhomogenat nicht absorbieren. Bei Verwendung des mit Nieren absorbierten Antiserums konnte die spermaspezifische LAP mittels der Ü berwanderungselektrophorese nur in Spermaspuren bis zu einer Lagerungszeit von 2 Monaten nachgewiesen werden, aber sie kam in Spuren aus anderen menschlichen Körperflüssigkeiten nicht vor. In der Ü berwanderungselektrophorese war die Darstellung der spermaspezifischen LAP bis zu einer Spermaverdünnung von 1 : 32 moglich. Die hier angegebene Methode erhöht den Beweiswert der Feststellung des Spermas beträchtlich und ist somit für die Spurenuntersuchung in der rechtsmedizinischen Praxis recht empfehlenswert.