Interactions of murine leukemia virus (mulv) with isolated lymphocytes. I. Virus replication in lymphocytes infected with friend virus and cultured in diffusion chambersin vivo

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Abstract
A new technique for infection of mature lymphocytes with murine leukemia virus (Friend) (MuLV‐F) is described. Spleen cells from normal, non‐infected donors were placed into diffusion chambers (constructed with 0.22 μm pore size Millipore filters) which were then implanted into the peritoneal cavities of normal syngeneic recipient mice. The cells were infected with an injection of MuLV‐F into the peritoneal cavity and, in some instances, also by placing virus into the chambers. Cells were recovered by treating the chamber content with elastase and collagenase. The infection was determined in two ways: (1) cells with replicating MuLV were enumerated as infectious centers (IC) on S+L‐ indicator cells; and (2) virus‐related cell membrane antigen (MA) was detected by immunofluorescence. Cells recovered from chambers after 2–3 weeks of culture represented about 10% of the original inoculum; viability was approximately 90%. The number of IC in MuLV‐F‐infected chambers was about 10 times higher than that obtained by infection and cultivation of spleen cells in vitro. The kinetics of IC and MA in chamber‐cultured, MuLV‐F‐infected spleen cells was similar to that in the spleen of infected mice during the first 10 days after infection. Later on, the process of infection within the chambers slowed down, reaching about 50% MA‐positive and about 10% IC‐positive cells, whereas the number of both IC‐ and MA‐positive cells in the spleen reached 80% or more. The infection of splenic lymphocytes in diffusion chambers occurred equally well when chambers were implanted into: (1) syngeneic, virus susceptible hosts; (2) syngeneic, lethally irradiated hosts; and (3) allogeneic, virus‐resistant hosts, suggesting that the process within the chamber is independent of MuLV replication in the tissues of the chamber‐bearing mouse. The diffusion chamber technique seems to provide an environment in which various types of isolated lymphocytes of different mouse strains can interact with MuLV almost as efficiently as in virto. Interactions Du Virus De La Leucémie Murine (Mulv) Avec Des Lymphocytes Isolés. I. Réplication Du Virus Dans Les Lymphocytes InfectéS Avec Le Virus De Friend Et Cultivés En Chambres De Diffusion In Vivo Les auteurs ont décrit une nouvelle technique d'infection des lymphocytes mǔrs avec le virus de la leucémie murine souche Friend (MuLV‐F). Des cellules spléniques de donneurs normaux, non infectés, ont été placées dans des chambres de diffusion (confectionnées avec des filtres Millipore dont les pores mesurent 0.22 μm) qui ont été ensuite implantées dans la cavité péritonéale de souris syngéniques normales. Les cellules ont été infectées au moyen d'une injection de MuLV‐F dans la cavité péritonéale ou, dans certains cas, par introduction directe du virus dans les chambres. Les cellules ont été recueillies par traitement du contenu des chambres avec un mélange d'élastase et de collagénase. L'infection a été appréciée de deux façons: 1) les cellules dans lesquelles le MuLV se réplique (centre infectieux ou IC) ont été dénombrées sur des cellules indicatrices S+L‐, et 2) l'antigàne membranaire (MA) lié au virus a été détecté par immunofluorescence. Les cellules récupérées dans les chambres apràs deux à trois semaines de culture représentaient à peu pràs 10% de l'inoculum initial; la viabilité était approximativement de 90%. Le nombre d'IC dans les chambres infectées par le MuLV‐F était environ 10 fois plus élevé que celui que l'on a relevé apràs infection et culture des cellules spléniques in vitro.La cinétique des IC et des MA dans les cellules spléniques infectées par le MuLV‐F et cultivées en chambres de diffusion est analogue à celle que l'on observe dans la rate des souris infectées pendant les dix premiers jours apràs l'infection. Par la suite, le processus infectieux s'est ralenti dans les chambres et l'on a dénombré environ 50% de cellules MA‐positives et quelque 10% d'IC, tandis que dans la rate, le nombre d'IC et de cellules MA‐positives atteignait 80% ou plus. L'infection des lymphocytes spléniques dans les chambres de diffusion se produit aussi bien lorsque les chambres sont implantées chez 1) des hǒtes syngéniques sensibles au virus, 2) des hǒtes synéniques létalement irradiés et 3) des hǒtes allogéniques résistant au virus, ce qui conduit à penser que le processus est indépendant de la réplication du MuLV dans les tissus de la souris porteuse de la chambre de diffusion. La technique des chambres de diffusion semble fournir un environnement dans lequel divers types de lymphocytes isolés de différentes souches murines peuvent interagir avec le MuLV presque aussi efficacement qu' in virto.