Studies on pectolytic enzyme system ofRhizoctonia solani Kühn properties of protopectinase

Publisher Website
Google Scholar
Abstract
Byly sledovány fysikálnê chemické vlastnosti protopektinázy vyluěovanéR. solani. Výsledky lze shrnout do těchto bodů: Preparát protopektinázy usmrcoval buňky i před skoněením macerace. Zředění vodou a sterilisovaným roztokem enzymu snižovalo macerační účinnost méně než toxicitu, z čehož plyne, že ve filtrátech kultur byly obsaženy toxiny jiného než enzymového charakteru. Protopektináza byla vysoce thermolabilní; aktivita mizela po pětiminutovém zahřátí při a nad 60δ C. Při uskladnění enzymu po 15 dnů při 25° C 80% aktivity bylo ztraceno. Uěinnost a toxicita protopektinázy byla nejvyšší při pH 3–4 a další optimum se projevovalo při pH 7,4. Dialysa způsobovala malou ztrátu úěinnosti, kterou bylo možno odstranit přidáním sterilisovaného nedialysovaného roztoku enzymu. Jinou zvláštností dialysovaného roztoku enzymu byla jeho maximální aktivita při pH 6,8 a snížená aktivita při pH 3,5. Protopektináza se srážela rychleji acetonem než ethanolem. Toxicita roztoku sraženiny byla nižši než odpovídalo předpokladu. Tato skutečnost opět ukazuje, že toxické látky, pravděpodobně neenzymového charakteru, byly odstraněny při ěástečném čištění srážením. Přidáním jednomocných a dvojmocných solí, zvláště ve vysolé koncentraci, k roztoku protopektinázy, způsobovalo urěité snížení aktivity; dvojmocné soli byly v tomto směru úěinnější. Ponoření zkoumané tkáně do roztoku solí nemělo však vliv na aktivitu protopektinázy. The study of physico-chemical properties of protopectinase secreted byR. solani was for the first time made and recorded in this paper. The results can be summarised as follows. Protopectinase preparation killed the cells even before maceration was completed. Dilution with water and with autoclaved enzyme solution reduced macerating activity less than toxicity, and thus, indicated that toxins other than enzymes were present in culture filtrates. Protopectinase was highly thermolabile as activity was completely lost after heating for 5 minutes at and above 60° C. When the enzyme was stored at 25° C. for 15 days, there was 80% loss of activity. Protopectinase activity and toxicity was highest at pH 3–4 and there appeared another optimum at pH 7·4. A slight loss of activity occurred on dialysis and was slightly restored by the addition of an autoclaved undialysed enzyme solution. Another peculiarity of the dialysed enzyme solution was that it was most active at pH 6·8 and less active at pH 3·5. Protopectinase was more readily precipitated with acetone than with ethanol. The toxicity of the solution of the precipitate was less than what would have been expected. This again indicated that toxic substances, presumably not enzymic, were removed during the partial purification by precipitation. The addition of monovalent and bivalent salts, particularly in high concentration, to the protopectinase solution resulted in some loss of activity; there was a greater loss with bivalent salts. But soaking test tissue in the salt solutions did not have any effect on protopectinase activity. В работе дани первые резулътаты исследованию по изучению физико-химических свойств протопектиназы грибом R. solani. Препарат из протонектиназы убивал клетки еще до того, как происходила полная мацерация. Разбавление водой и раствором знзима, обработанного в автоклаве, понижало способность к мацерации меньше, чем токсичность. Этим можно доказать, что в фильтратах культур присутствовали также и токсины, отличающиеся от энзимов. Протопектиназа была очень термолабильна, так как полностью потеряла активность после нагревания до 60° C и выше в тенение 5 минут. Нри хранении энзима при 25°C в течение 15 дней препарат потерял 80% активности. Активность и токсичность протопектиназы была наивысшей при pH 3–4, а кроме того, наблюдалея еще один оптимум при pH 7,4. Слабая потеря активности происходила при диализе и слегка восстанавливалась при прибавлснии недиализиронанного раствора энзима, обрабоганяого в автоклаве. Другой особенностью раствора энзима после диалнза являлось то обстоятельство, что он был наиболее активным при pH 6.8 и наименее активным при pH 3,5. Протопектиназа легче осаждалась ацетоном, чем этиловым спиртом. Растворением осадка получался раствор, токсичность которого была гораздо меньше, чем следовало ожидать. Это снова доказывало, что токсические вещества не имеют, вероятно, энзиматический характер. Они были удалены при частичной очистке путем осаждения. Прибавление к раствору протопектиназы одновалентных и двухвалентных солей, особенно в большой концентрации, влекло за собой некоторую потерю активности; большая потеря была в случае двухвалентных солей. Однако, намачивание ткани, на которой производились опыты, в растворе солей не оказывало никакого действия на активность протопектиназы.

This publication has 3 references indexed in Scilit: