Multiple forms of soluble monophenol, dihydroxyphenylalanine: Oxygen-oxidoreductase (EC 1.14.18.1) from potato tubers (Solarium tuberosum)

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Abstract
Die Gelchromatographie einer löslichen Phenoloxydase aus Kartoffeln (SorteMaritta) an Sephadex G-200 ergab eine Trennung in mindestens sechs Fraktionen mit Aktivität gegenüber Dopa. Nur hochmolekulare Enzym-Formen zeigten auch Monophenoloxydase-Aktivität. Bei der Rechromatographie der Enzym-Form mit dem höchsten Molekulargewicht wurde die gleiche Molekulargewichtsverteilung erhalten wie beim Rohenzym. Die Molekulargewichte deuten darauf hin, daß das Rohenzym Assoziate aus Untereinheiten mit einem Molekulargewicht von etwa 36000 Daltons enthdlt. Die Überprüfung der Fraktionierung an Sephadex durch Elektrophorese in Polyacrylamidgel ergab, daß vermutlich mehrere Monomere mit unterschiedlichen isoelektrischen Punkten vorliegen, die in verschiedener Weise zu Oligomeren assoziieren können. Bei der Elektrophorese in Polyacrylamidgel in Anwesenheit von SDS traten die monomeren Formen nicht auf; das Dimer und höher aggregierte Oligomere wurden erhalten. Gel chromatography on Sephadex G-200 was used to separate a soluble phenoloxidase from potatoes (var.Maritta) into at least six active fractions with dopa (dihydroxyphenylalanine) as substrate. Only high-molecular-weight-enzyme forms exhibited monophenoloxidase activity. Re-chromatography of the highest-molecular-weight form gave the same molecular weight distribution as with the crude enzyme. The molecular weights indicate association phenomena of subunits with a molecular weight of about 36000 daltons. According to polyacrylamide-gel electrophoresis, several monomeric forms with different isoelectric points seem to be present. This suggests that the large number of multiple forms of the enzyme arises from various combinations of identical and/or different subunits. SDS polyacrylamide gel electrophoresis failed to show the monomeric forms; the dimer and higher oligomers were obtained.