Limited pathogenicity of Usutu virus for the domestic chicken (Gallus domesticus)

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Abstract
In summer 2001, Usutu virus (USUV), a mosquito-borne flavivirus, was isolated for the first time in Europe during a mortality incident among Eurasian blackbirds (Turdus merula) in Austria. Chickens are frequently used as sentinel animals for arbovirus surveillance systems. In the present study, the pathogenicity of USUV for specific pathogen free chickens was investigated. Ten 2-week-old chickens were inoculated intravenously with 0.1 ml inoculum containing 103 median (50%) tissue culture infectious dose of USUV strain Vienna 2001-blackbird (939/01). Clinical signs, viraemia, gross and microscopic lesions, contact transmission and immunological response were evaluated. No clinical signs were observed in the USUV-inoculated animals during the experimental period. Pathological examination showed moderate splenomegaly and follicular infiltrates in the liver of several inoculated animals. Mild non-suppurative encephalitis was observed in the brain tissue of one virus-inoculated chicken examined 7 days post inoculation (d.p.i.). USUV nucleic acid was detected by reverse-transcriptase polymerase chain reaction in the organs of six inoculated chickens, although immunohistochemistry for flavivirus antigen was negative in all tissues from all chickens. Virus shedding was shown in three inoculated birds by detecting USUV RNA in cloacal swabs of two chickens at 5 d.p.i., and in the cloacal and pharyngeal swabs of one chicken at 7 d.p.i. Based on detection of viral RNA in peripheral blood mononuclear cells, viraemia was detected only in two chickens (at 7 d.p.i.). Only one of the inoculated chickens developed an antibody response. There was no evidence of virus transmission to chickens kept in contact with inoculated birds. No USUV was isolated from in-contact birds and all in-contact and control animals lacked USUV-specific antibodies. The present data suggest that domestic chickens are not at risk of developing clinical disease following USUV infection and that chickens are unlikely to be useful for sentinel purposes in USUV surveillance programmes. Pathogénicité limitée du virus Usutu pour le poulet domestique (Gallus domesticus) Au cours de l'été 2001, un flavivirus, le virus Usutu (USUV), transmis par un moustique, a été isolé pour la première fois en Europe durant un épisode de mortalité observé chez des merles noirs eurasiens (Turdus merula) en Autriche. Les poulets sont souvent utilisés comme animaux sentinelles dans les systèmes de surveillance des arbovirus. Dans cette étude, la pathogénicité du l'USUV pour les poulets exempts de microorganismes pathogènes spécifiés, a été étudiée. Dix poulets âgés de 2 semaines ont été inoculés par voie intraveineuse avec 0,1 ml d'inoculum contenant 103 TCID50 de la souche Vienna 2001-blackbird (939/01) de l'USUV. Les symptômes, la virémie, les lésions macro et microscopiques, la transmission par contact et la réponse immunologique ont été évalués. Aucun symptôme n'a été observé chez les animaux inoculés avec l'USUV durant la période expérimentale. L'examen pathologique a montré une splénomégalie modérée et des infiltrats folliculaires dans le foie de plusieurs animaux inoculés. Une légère encéphalite non suppurative a été observée dans les tissus du cerveau d'un poulet inoculé avec le virus et examiné 7 jours après l'inoculation (d.p.i). L'acide nucléique de l'USUV a été détecté par RT-PCR dans les organes de 6 poulets inoculés, bien que l'immunohistochimie vis-à-vis de l'antigène flavivirus ait été négative pour tous les tissus de tous les poulets. La diffusion du virus a été mise en évidence chez 3 poulets inoculés, par détection d'ARN, au niveau des écouvillons cloacaux, 5 d.p.i., et au niveau des écouvillons cloacaux et trachéaux, 7 d.p.i.. La virémie a été recherchée par mise en évidence de l'ARN viral dans les cellules mononucléaires du sang périphérique, seuls deux poulets ont été positifs 7 d.p.i.. Un seul poulet inoculé a développé une réponse en anticorps. Il n'a pas été mis en évidence de transmission virale chez les poulets maintenus en contact de ceux inoculés. L'USUV n'a pas été isolé chez les animaux contact et aucun anticorps spécifique du USUV n'a été détecté chez tous les contacts et les témoins. Toutes ces données suggèrent que (1) les poulets ne risquent pas de développer une maladie clinique après l'infection par le USUV et (2) les poulets ne sont probablement pas utiles comme sentinelles dans les programmes de surveillance de l'USUV. Beschränkte Pathogenität des Usutuvirus für das Haushuhn (Gallus domesticus) Im Sommer 2001 wurde das Usutuvirus (USUV), ein durch Mücken übertragbares Flavivirus erstmals in Europa im Zusammenhang mit Todesfällen bei eurasischen Amseln (Turdus merula) in Österreich isoliert. Hühner werden oft als Indikatortiere in Arbovirus-Überwachungsprogrammen eingesetzt. In der vorliegenden Studie wurde die Pathogenität des USUV für spezifisch pathogen freie Hühner untersucht. 10 zweiwöchigen Hühnerküken wurde intravenös 0,1 ml Inokulum mit 103 TCID50 des USUV-Stamms Vienna 2001-Amsel (939/01)...