Influence of econazole and 5-fluorocytosine on the ultrastructure ofAspergillus fumigatusand the cytochemical localization of calcium ions as measured by laser microprobe mass analysis

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Abstract
The ultrastructural changes and the localization of Ca++ ions have been investigated in Aspergillus fumigatus after exposure in vitro to econazole (50 µg ml-1) and to 5-fluorocytosine (100 µg ml-1) for 24h. The changes obtained with econazole concerned the cell periphery, necrotization of mitochondria and hyperactivity of the central vacuole. After cytochemical Ca++ localization a marked increase in precipitate was observed on mitochondria, vacuoles and collapsed membranes, compared to the control. Laser microprobe mass analysis confirmed that the measured amount of Ca++ ions corresponded to the degree of precipitate formation in the different cellular compartments. After exposure to 5-fluorocytosine, abnormal behaviour of the nuclei and internal lipidification of the mitochondria and of the cytoplasm were seen. No discernable Ca++ activity was present on the cellular structures by cytochemical localization. Assay by laser microprobe mass analysis, however, showed a slight increase in Ca++ which points to a structural bonding of the Ca++. In Aspergillus fumigatus, der in vitro mit 50 µg ml-1 Econazol und 100 µg ml-1 5-Fluorocytosin während 24h behandelt worden war, wurden die ultrastrukturellen Veränderungen und die Lokalisation der Ca++ Ionen untersucht. Die Veränderungen unter Einfluss von Econazol betreffen die Zellperipherie, die Nekrotisierung der Mitochondrien und die Hyperaktivität der zentralen Vakuolen. Die zytochemische Lokalisation von Ca++ Ionen zeigte eine drastische Zunahme von Präzipitat an den Mitochondrien, Vakuolen und zusammengefallenen Membranen im Vergleich zu den Kontrollen. Durch Laser Microprobe Mass Analysis wurde bestätigt, dass die gemessene Menge von Ca++ Ionen mit dem Grad der Präzipitationsbildung in den verschiedenen Zellkompartimenten übereinstimmte. Nach Einwirkung mit 5-Fluorocytosin wurde abnormes Verhalten des Nukleus und innere Lipidifikation der Mitochondrien und des Zytoplasma beobachtet. Keine erkennbare Ca++ Aktivität war vorhanden an den zellulären Strukturen mittels zytochemischer Lokalisation. Die Kontrolle mit Laser Microprobe Mass Analysis ergab jedoch einen kleineren Anstieg in Ca++ Ionen, der auf eine strukturelle Bindung von Ca++ hinweist. Diese Art von Ca++ Ionen war nicht erkennbar mittels zytochemischer Methoden.