A rapid solid-phase extraction and HPLC/DAD procedure for the simultaneous determination and quantification of different benzodiazepines in serum, blood and post-mortem blood

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Abstract
A rapid and quantitative method for the determination of benzodiazepines using high-performance liquid chromatography (HPLC) with diode-array detection (DAD) is reported. The drugs were extracted from serum, blood or post-mortem blood using C18 extraction columns. Brotizolam was used as internal standard. Experiments with spiked serum/blood samples resulted in recoveries between 75% and 94% for all investigated benzodiazepines. Excellent linearity was obtained over the concentration range 5–1500 ng benzodiazepine/ml. The limit of detection was approximately 2 ng/ml. The detection of low therapeutic serum levels of highly potent benzodiazepines is also possible. Eine schnelle Methode zur quantitativen Bestimmung von Benzodiazepinen mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) mit Dioden-Array-Detektion (DAD) wird beschrieben. Die Substanzen werden aus Serum, Vollblut oder Leichenblut mit Hilfe von C18-Extraktionssäulen extrahiert. Brotizolam wird als interner Standard eingesetzt. Versuche mit aufgestockten Serum-/Blutproben führten für sämtliche untersuchten Benzodiazepine zu Wiederfindungsraten zwischen 75% und 94%. Eine ausgezeichnete Linearität wurde über den Konzentrationsbereich von 5–1500 ng Benzodiazepin/ml beobachtet. Die Nachweisgrenze lag für alle Substanzen bei annähernd 2 ng/ml. Auch für die niedrig dosierten Benzodiazepine ist die Erfassung der therapeutischen Konzentrationsbereiche gewährleistet.

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