Multiplication of poliomyelitis virus in cells nourished with chemically defined media of elementary composition

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Abstract
Chemisch definierte Nährflüssigkeiten, für die direkte Untersuchung verschiedener Enzymsysteme in Gewebekulturen dienend, wurden auf das Überleben und die Virusproduktion der Zellen untersucht. Relativ hohe Virustiter wurden in HeLa-Zellkulturen mit einem „Substrat-Medium“ (Iso II) gefunden. Dieser Nährboden enthielt keine physiologischen Mengen von anorganischen Salzen oder Spurenelementen, aber einige Metaboliten, ein Substrat für Phosphomonoesterase und Tris-HCl Puffer. Isotonische Saccharoselösung allein reichte nicht aus, eine vergleichbare Virusvermehrung in den Zellen mit kompletter Nährflüssigkeit zu fördern, aber eine reiche Virusausbeute wurde in einer Mischung von Saccharose und Hanks - Lösung festgestellt. Diese Mischung war das einfachste Medium, womit langes Überleben und logarithmische Titererhöhung erzielt wurden. Sehr intensive Virussynthese wurde mit einer modifizierten Hanks schen Lösung (angereichert mit Glucose) beobachtet, aber die Intaktheit der Zellen wurde in mehr kompletten Nährböden besser erhalten. Wenn organisch gebundene kleinmolekulare Phosphate den beschriebenen Versuchslösungen zugefügt wurden, hat die Abwesenheit anorganischer Phosphationen die Zellphysiologie und Virusmultiplikation nicht beeinflußt. Obwohl die Virusvermehrung innerhalb 24 Stdn. ihr Maximum erreichte, wurden zur Verfolgung des biochemischen Verhaltens wesentlich längere Inkubationszeiten gewählt (72 Stunden). Vital-Färbungen halfen bei der Beurteilung der morphologischen und funktionellen Intaktheit der normalen Zellen. „One step“-Vermehrungskurven zeigen die zeitliche Reihenfolge der Virusinfektion in HeLa-Zellkulturen mit kompletten und mit synthetischen Medien (ohne und mit anorganischen Salzen). Die Titerdifferenzen betrugen nach 24 Stdn. über einen Log., aber die rasche Inaktivierung bei weiterer Inkubation war eine auffallende Erscheinung bei Verwendung der inkompletten Nährflüssigkeit (ohne physiologische Mengen von anorganischen Ionen). Zugabe von Salzen glich diese Unterschiedlichkeiten aus und standardisierte die Methodik so, daß die Brauchbarkeit der verbesserten Substrat-Medien für direkte Enzymuntersuchungen von durch Poliomyelitis-Virus infizierten Zellen bewiesen wurde.