Use of FTA® filter paper for the molecular detection of Newcastle disease virus

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Abstract
The feasibility of using Flinders Technology Associates filter papers (FTA® cards) to collect allantoic fluid and chicken tissue samples for Newcastle disease virus (NDV) molecular detection was evaluated. Trizol® RNA extraction and one-step reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) were used. FTA® cards allowed NDV identification from allantoic fluid with a titre of 105.8 median embryo lethal doses/ml. The inactivated virus remained stable on the cards for 15 days. NDV was detected from FTA® imprints of the trachea, lung, caecal tonsil and cloacal faeces of experimentally infected birds. RT-PCR detection from FTA® cards was confirmed by homologous frozen-tissue RT-PCR and virus isolation. Direct nucleotide sequence of the amplified F gene allowed prediction of NDV virulence. No virus isolation was possible from the FTA® inactivated samples, indicating viral inactivation upon contact. The FTA® cards are suitable for collecting and transporting NDV-positive samples, providing a reliable source of RNA for molecular characterization and a hazard-free sample. Utilisation du papier filtre FTA® pour la détection moléculaire du virus de la maladie de Newcastle La faisabilité de l'utilisation des cartes FTA® pour récolter le liquide allantoïdien (AF) et les échantillons de tissu de poulet pour la détection moléculaire du virus de la maladie de Newcastle (NDV) a été évaluée. L'extraction de l'ARN par le Trizol® et la réaction en une étape de transcription inverse et d'amplification en chaîne par polymérase (RT-PCR) ont été utilisées. Les cartes FTA® ont permis l'identification du NDV à partir du AF avec un titre de 105.8 doses létales 50 pour l'embryon/ml. Le virus inactivé est resté stable sur les cartes pendant 15 jours. Le NDV a été détecté sur FTA à partir des empreintes de la trachée, des poumons, des amygdales cæcales et des fèces cloacales de poulets infectés expérimentalement. La détection par RT-PCR à partir de cartes FTA® été confirmée par la RT-PCR sur un mélange de tissu congelé homologue et par l'isolement du virus. La séquence nucléotidique directe du gène F amplifié a permis la prédiction de la virulence du NDV. Aucun isolement de virus n'a été possible à partir des échantillons inactivés des cartes FTA®, indiquant l'inactivation viral par contact. Les cartes FTA® conviennent pour la collecte et le transport des échantillons positifs en NDV, en fournissant une source fiable d'ARN pour la caractérisation moléculaire et un échantillon ne présentant aucun risque. Verwendung von FTA®-Filterpapier zum molekularen Nachweis des Virus der Newcastle Krankheit Es wurde die Verwendbarkeit von FTA®-Karten für die Entnahme von Allantoisflüssigkeit und Hühnergewebeproben zum molekularen Nachweis des Virus der Newcastle Krankheit (NKV) untersucht. Dazu wurde eine Trizol®-RNS-Extraktion und eine einstufige Reverse Transkriptase-Polymerasekettenreaktion (RT-PCR) durchgeführt. Die FTA®-Karten ermöglichten die NKV-Identifizierung aus der Allantoisflüssigkeit mit einem Titer von 105,8 Embryo letalen Dosen50/ml. Inaktiviertes Virus blieb auf der Karte über 15 Tage lang stabil. NKV wurde in FTA®-Abstrichen von Trachea, Lunge, Zäkaltonsillen und Kloake experimentell infizierter Hühner nachgewiesen. Der RT-PCR-Nachweis aus den FTA®-Karten konnte durch RT-PCR und Virusisolation aus entsprechenden, eingefrorenen Gewebeproben bestätigt werden. Die direkte Sequenzierung des amplifizierten Gens erlaubte die Feststellung der NKV-Virulenz. Aus den inaktivierten FTA®-Proben konnte kein Virus isoliert werden, was auf eine Virusinaktivierung unmittelbar nach dem Kontakt hinweist. Die FTA®-Karte ist für die Entnahme und den Transport NKV-positiver Proben geeignet und stellt somit eine sichere RNS-Quelle zur molekularen Charakterisierung und eine gefahrlose Probe bereit. Uso del papel de filtro de FTA® para la detección molecular del virus de la enfermedad de Newcastle Se evaluó la viabilidad de las targetas de FTA® para la toma de muestras de tejidos de aves y de líquido alantoideo (AF) para la detección molecular del virus de la enfermedad de Newcastle (NDV). Se utilizaron la extracción de RNA mediante Trizol® y la transcriptasa reversa y reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) en un solo paso. Las targetas de FTA® permitieron la identificación de NDV a partir de AF con un título de 105.8 dosis letales medias en embrión /ml. El virus inactivado permaneció estable en las targetas durante 15 días. Se detectó NDV a partir de improntas de tráquea, pulmón, tonsila cecal y heces de la cloaca de aves infectadas experimentalmente. La detección mediante RT-PCR a partir de targetas FTA® se confirmó mediante RT-PCR de tejidos homólogos congelados y aislamiento vírico. La secuenciación nucleotídica directa del gen F amplificado permitió predecir la virulencia de NDV. No se pudo aislar virus a partir de las muestras inactivadas en FTA®, lo cual indicó la inactivación del virus tras el contacto. Las targetas FTA® son adecuadas para la toma y transporte de muestras positivas de NDV, proporcionando una fuente de RNA fiable y libre de peligrosidad para la caracterización molecular.