Induced Increase in Virulence of Low Pathogenic Avian Influenza by Serial Intracerebral Passage in Chickens

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Abstract
Two highly pathogenic avian influenza (HPAI) virus clones that met the criteria for high-pathogenicity avian influenza viruses, by possessing a multibasic hemagglutinin (HA) cleavage site, were isolated from an H5N1 outbreak in Norfolk, England, in 1991–92. These two isolates, A/turkey/England/50-92/91 (50-92) and A/turkey/England/87-92/91 (87-92), displayed differences in virulence as determined by intravenous pathogenicity index-3 and -0, respectively. DNA sequencing of these two isolates identified 10 amino acid differences throughout the genome: three in HA and polymerase B2 (PB2) and two in polymerase B1 (PB1) and single mutations in nucleoprotein (NP) and polymerase A (PA). Serial intracerebral passages were performed in 1- or 2-day-old specific pathogen free (SPF) chicks with 87-92. Viruses reisolated from each bird passage displayed increases in intracerebral pathogenicity index values (from 0 to 1.9) and therefore virulence. Reverse transcriptase polymerase chain reaction and DNA sequenc... Resumen Nota de Investigación—Incremento en la virulencia de un virus de influenza aviar de baja patogenicidad, inducido mediante pasajes intracerebrales seriados en pollos. De un brote del virus H5N1 ocurrido entre los años 1991 y 1992 en Norfolk, Inglaterra, se aislaron dos clones de virus de influenza aviar altamente patógenos que cumplían con el criterio para ser considerados virus de influenza de alta patogenicidad por la presencia de múltiples aminoácidos básicos en el sitio de corte de la proteína hemoaglutinina. Estos dos aislamientos, A/turkey/England/50-92/91 (50-92) y A/turkey/England/87-92/91 (87-92), mostraron diferencias en virulencia según se determinó mediante los índices de patogenicidad intravenosa (3 y 0, respectivamente). Mediante la secuenciación del ADN de estos dos aislamientos se identificaron 10 diferencias en los aminoácidos del genoma: tres en la proteína hemoaglutinina y en la polimerasa B2, dos en la polimerasa B1 y mutaciones individuales en la nucleoproteína y en la polimera...