Dissolution des Inclusions du Virus de la Polyédrose Nucléaire du DiptèreTipula paludosa MEIG. Etude Ultrastructurale du Virion

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Abstract
Les inclusions de la polyédrose nucléaire deT. paludosa ont été purifiées par gradients de densité de sucrose, leur morphologie décrite au microscope électronique à balayage, et leurs conditions de solubilisation étudiées. Ces inclusions connues pour leur résistance inhabituelle ont été dissoutes dans des conditions maintenant l'intégrité des particules virales, en utilisant une solution de thioglycolate de sodium 0,125m + HCO3Na 0,125m, pH 10,5. Les virions extraits des inclusions ont été purifiés par gradients de densité de sucrose, et leur structure étudiée au microscope électronique. En coloration négative, le virion est un bâtonnet mesurant 230 à 240 nm de long sur 100 à 110 nm de diamètre. Il est formé d'une nucléocapside entourée d'une enveloppe lâche. Sur des particules partiellement dégradées, on observe à la surface de la capside, de petites sous-unités disposées en hélice (pàs d'environ 40 Å), correspondant vraisemblablement à des capsomères. Après coloration à l'acétate d'uranyle, un filament flexueux s'observe parfois sortant d'une extrêmité de la capside. Sur coupes fines d'hémocytes, les virions inclus dans les polyèdres ou libres dans le nucléoplasme, présentent la même morphologie mais leur diamètre n'excède pas 80–85 nm. Le virus de la polyédrose nucléaire deT. paludosa réunit tous les critères pour son incroporation dans la famille des Baculoviridae. The inclusion bodies of the nuclear polyhedrosis virus ofT. paludosa MEIG. were purified by sucrose density gradients, their morphology described using scanning electron microscopy, and the conditions for their solubilization investigated. These inclusions known to be unusually resistant to dissolution, were successfully dissolved in conditions maintaining the integrety of the virus particles by using a 0.125m sodium thioglycolate +0.125m sodium bicarbonate solution, pH 10.5. The virions extracted from the inclusions were purified by sucrose density gradients and their fine structure studied in electron microscopy. In PTA-stained preparations the virion is rod-shaped measuring 230–240 nm in length and 100 to 110 nm in diameter. It consists of an inner nucleocapsid surrounded by a loose envelope. Partially degraded virions reveal small subunits arranged in a regular helix (pitch of approximately 40 Å) at the surface of the capsid. These subunits likely represent the virus capsomers. A flexuous ropelike structure protruding at one end of the capsid is sometimes observed in partially degraded virions stained with uranyl acetate. In thin sections of infected hemocytes, the virions occluded on polyhedra or free in the nucleoplasm exhibit the same morphology although their diameter does not exceed 80–85 nm. The nuclear polyhedrosis virus ofT. paludosa meets all the criteria for incorporation into the Family Baculoviridae.