Flow Cytometry and Sizing for Routine Andrological Analysis

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Abstract
Summary: Flow fluorometry and Coulter type sizing analysis of sperm have been applied separately in order to improve human semen analysis. Different methods of sample preparation were evaluated and a protocol involving prestaining pepsin treatment of sperm samples is proposed for fluorometric analysis. The data obtained with fluorometry and sizing analysis result in different kinds of information: Coulter counting allows to automate sperm counting and fluorometry yields more datailled information about normozoospermia and oligozoospermia by determining the proportion of mature spermatozoa and immature germ‐cells. These two methods, together with light microscopy, may help to explore the correlation of fertility and pathology of spermatozoa. The aim of these investigations is to yield the preconditions for simultaneous two‐parameter analysis of DNA content and cellular size distributions. Zusammenfassung: Durchflußcytophotometrie und Größenmessung für andrologische Routineuntersuchungen von Spermatozoen Durchflußanalyse und Größenanalyse nach dem Coulter‐Prinzip wurden angewandt, um die Begutachtung menschlichen Spermas zu verbessern. Unterschiedliche Methoden der Probenaufbereitung wurden ausprobiert, und ein Protokoll mit Pepsinbehandlung der Spermatozoenproben für fluorometrische Analysen wird vorgeschlagen. Die mit der Cytofluorometrie und Größenanalyse erhaltenen Daten ergeben unterschiedliche Informationen: Das Coulter‐Prinzip erlaubt die Automatisierung der Spermatozoenzählung, und die Fluorometrie ergibt detailliertere Erkenntnisse über Normozoo‐spermie und Oligozoospermie, da die Unterscheidung von reifen Spermatozoen und unreifen Keimzellen ermöglicht wird. Diese beiden Methoden können in Kombination mit der Lichtmikroskopie helfen, die Korrelation zwischen Fertilität und Pathologie von Spermatozoen zu erkunden. Das Ziel dieser Untersuchungen ist es, die Voraussetzungen für gleich‐zeitige Zweiparameteranalysen des DNA‐Gehaltes und der zellulären Größenverteilungen zu liefern.