The use of histolyn CYL in an enzyme immunoassay to detectHistoplasma capsulatumantibodies

Publisher Website
Google Scholar
Abstract
Histolyn CYL, the yeast phase reagent, has been employed as the antigen in an enzyme immunoassay (ELISA) to detect antibody to Histoplasma capsulatum in sera from experimentally sensitized rabbits and from humans with histoplasmosis. Three different lots of Histolyn CYL were initially evaluated with respect to antibody detection in individual and pooled rabbit serum specimens. Optimal reactivity was obtained with 4.5 µg (total dry weight) per ml of lots 2 and 3 of the reagent. The optimally diluted pooled reagent detected antibody titers ranging from 1:16 to 1:8192 in 36 rabbit sera. In contrast, a marked decrease in sensitivity was evidenced when the same sera were assayed by complement fixation and immunodiffusion tests with commercially available reference reagents. Complement fixation titers ranged from 0 to 1 : 128 and immunodiffusion tests on undiluted sera were positive with only 5 specimens. Twenty-five sera from patients with acute, chronic and disseminated histoplasmosis were also assayed by the ELISA with the reagent described above. Titers ranged from less than 1 : 16 to 1 : 20,480 or greater. Complement fixation titers ranged from 0 to 1 : 1024 (mycelial antigen) and from 0 to 1 : 256 (whole yeast cell antigen). No antibody was detected in 7 specimens with mycelial antigen or in 3 specimens with the yeast cell antigen. Immunodiffusion tests on undiluted sera were positive with 9 of 11 specimens. Minimal cross reactivity was evidenced when Histolyn CYL was used in the ELISA to detect anti-Coccidioides immitis antibody in sera from infected animals and humans. These data encourage the continued development of this method for the serodiagnosis of human histoplasmal infection. L'Histolyn CYL, préparée à partir de la phase levure d'Histoplasma capsulatum, a été utilisée comme antigène dans une méthode immunoenzymatique (ELISA) de recherche d'anticorps dans le serum de lapins immunisés par ce même produit et dans le sérum de patients atteints d'histoplasmose. Trois lots différents d'Histolyn CYL ont été comparés pour la détection d'anticorps dans less sérum de lapins, testés individuellement ou en pools. Les meilleurs résultats ont été obtenus pour une concentration de 4·5 ng de poids sec par millilitre des lots 2 et 3 du reactif. Un pool de ces deux lots, à la concentration optimale, a permis de detecter des anticorps à des titres variant du 1:16 au 1:8152 dans le sérum de 36 lapins. Lorsque les mêmes sérums sont confrontés aux antigènes commerciaux de référence actuels, par reaction de fixation du complement ou immunodiffusion, on note une baisse importante de la sensibilité de la détection des anticorps; ainsi, la réaction de fixation du complement a présenté des titres variant de 0 à 1:128 et seuls 5 sérums ont présenté des ares de précipitation en immunodiffusion, réalisée sans dilution préalable. Trent cinq sérums de malades atteints d'histoplasmoses aigues, chroniques et disséminées furent également testés en ELISA avec l'Histolyn CYL selon les conditions définies ci dessus. Les titres de la réaction ont varié de 1:16 a 1:20480 et plus. Les mêmes sérums ont montré des titres de réaction de fixation du complément variant de 0 à 1024, pour l'antigéne mycelien, et de 0 à 256 pour l'extrait total de levure; les réactions furent totalement negatives pour 7 sérums avec l'antigène mycelien et 3 sérums avec l'antigène levure. L'immunodiffusion pratiquée avec 11 serums non dilués fut positive dans 9 cas. L'ELISA, pratiquée avec l'Histolyn CYL, a montré des réactions croisées minimes avec des sérums provenant d'animaux ou de patients infectés par Coccidioides immitis. Ces résultats incitent à poursuivre le développement de cette méthode pour la diagnostique serologique de l'histoplasmose humaine.