Enzymaktivität isolierter Leukozytenpopulationen

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Abstract
Heparinized venous blood was stored under sterile conditions at different temperatures (4 C, 20 C, 37 C) for various intervals (0–7 days). After storage the granulocytes and lymphocytes were isolated with routine methods. Naphthol AS-D-chloroacetate esterase as a granulocyte marker and acid α-naphthyl acetate esterase as a T-lymphocyte marker were identified on smears of the washed cell suspension. Different enzymes were identified in the cell sediment with electrophoresis. Relatively pure lymphocyte suspensions were obtained within the first 24 h. After this time, however, the percentage of these mononuclear cells declined markedly. The percentage of isolated granulocytes varied slightly; there was a marked predominance of granulocytes (more than 70%) at all intervals investigated during the isolation. Cytochemical analysis of the granulocytes and lymphocytes indicated that the decrease in the percentage of enzyme-positive cells depends in each case on the duration of the storage interval. During the first 24 h, only PGM1 and GOTM could be identified in the lymphocyte suspension with horizontal starch gel electrophoresis. The enzymes PGM1, PGM3, PGI, MDH, GOTM, 6-PGD, ADA could always be identified in the granulocyte suspension; AK, FUCA, MEM could be occasionaly identified; and GPT and GLO could never be identified. Heparinisiertes Venenblut wurde unterschiedlich lange (0–7 Tage) bei differenten Temperaturen (4°C, 20°C, und 37°C) steril gelagert; anschließend erfolgte eine Isolation von Granulozyten und Lymphozyten entsprechend bekannten Routinemethoden. Von den gewaschenen Zellsuspensionen wurden Ausstrichpräparate hergestelt und die Naphthaol AS-D-Chlorazetat Esterase (Markerenzym der Granulozyten) sowie die saure α-Naphtylazetat Esterase (Markerenzym der T-Lymphocyten) nachgewiesen. Aus dem Zellsediment wurden verschiedene Enzyme elektrophoretisch dargestellt. Innerhalb der ersten 24 h konnten vergleichsweise reine Lymphozyten-suspensionen gewonnen werden; anschließend nahm der Prozentsatz dieser mononukleären Zellen deutlich ab. Der Prozentsatz isolierter Granulozyten schwankte leicht, wobei dieser Zelltyp zu allen untersuchten Zeitpunkten der Isolation mit mehr als 70% deutlich überwiegend auftrat. Bei der zytochemischen Untersuchung zeigte sich, daß der Anteil Enzym-positiver Granulozyten und Lymphozyten jeweils in Abhängigkeit von der Lagerungszeit abnahm. Elekrophoretisch konnten aus Lymphozyten innerhalb der ersten 24 h ausschließlich PGM1 und GOTM nachgewiesen werden. Aus Granulozytensuspensionen waren folgende Enzyme regelmäßig nachweisbar: PGM1, PGM3, PGI, MDH, GOTM, 6-PGD, ADA; unregelmäßig nachweisbar waren: AK, FUCA, MEM; gar nicht nachweisbar waren: GPT, GLO